該模型采用了CRISPR/Cas9技術(shù)，創(chuàng)新性地結(jié)合了人類遺傳學(xué)與動(dòng)物基因編輯技術(shù)，首次在小鼠上重構(gòu)了與人類疾病類似的遺傳模式，在Tbx6基因上同時(shí)引入無(wú)效突變和promotor區(qū)域的亞效等位基因，并將二者結(jié)合，形成復(fù)合雜合突變并獲得相應(yīng)的脊柱畸形表型。該模型是國(guó)際上首創(chuàng)的復(fù)合雜合突變脊柱畸形表型，對(duì)于解釋先天性脊柱側(cè)凸的分子機(jī)制和發(fā)病過(guò)程具有極高的研究討論價(jià)值。

該基因編輯小鼠將在屏障隔離環(huán)境（北京協(xié)和醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）內(nèi)進(jìn)行繁育、飼養(yǎng)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)，其監(jiān)督管理措施由動(dòng)物中心負(fù)責(zé)。屏障隔離期間將保持清潔，保證其具有SPF級(jí)別清潔度，減少感染及發(fā)病幾率。嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室管理，防止小鼠外泄，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)將禁止其與野生型小鼠交配，保證編輯基因組序列不向自然界流通。上述措施將保證該動(dòng)物模型的生物安全性，避免其影響生態(tài)環(huán)境。

小鼠表現(xiàn)為血清中高水平的肌酸激酶，骨骼肌纖維Evans-blue 摻入陽(yáng)性。骨骼肌跑步運(yùn)動(dòng)能力減弱、抓力減弱、骨骼肌纖維張力減弱。

（1） 血清CK檢測(cè)

肌酸激酶在骨骼肌膜完整時(shí)不會(huì)釋放到血液中，Mdx肌營(yíng)養(yǎng)不良的小鼠由于肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白的功能缺失，肌纖維膜受損，肌酸激酶會(huì)從骨骼肌組織中釋放出來(lái)，表現(xiàn)為血清中肌酸激酶的水平升高。

（2） 伊文氏蘭(Evens Blue)染色

Evens-Blue是一種經(jīng)激發(fā)可產(chǎn)生紅色熒光的染料。完整的肌纖維表現(xiàn)為染料摻入陰性，受損傷的肌纖維表現(xiàn)為染料摻入陽(yáng)性。由于Mdx小鼠骨骼肌纖維膜不完整，因此，腹腔注射Evens-blue染料，取Mdx小鼠骨骼肌切片，可以檢測(cè)到較多Evens-blue陽(yáng)性區(qū)域。

（3） 骨骼肌力量測(cè)試

Mdx小鼠肌纖維結(jié)構(gòu)的不完整，也導(dǎo)致了小鼠骨骼肌功能的減弱。取出完整的趾長(zhǎng)伸肌的肌群，進(jìn)行肌肉力量的電生理實(shí)驗(yàn)，Mdx小鼠表現(xiàn)為骨骼肌張力的減弱。用抓力測(cè)量?jī)x對(duì)小鼠的抓力進(jìn)行測(cè)量，Mdx小鼠表現(xiàn)為前后肢抓力的減弱。

（4） 跑步實(shí)驗(yàn)

Mdx小鼠的骨骼肌耐力減弱，在進(jìn)行跑步實(shí)驗(yàn)時(shí)，小鼠的運(yùn)動(dòng)時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離會(huì)顯著減少。

（5） 病理診斷

由于Mdx小鼠經(jīng)歷反復(fù)的骨骼肌損傷修復(fù)，骨骼肌組織內(nèi)會(huì)出現(xiàn)較多的炎胞浸潤(rùn)以及纖維化。

SPF級(jí)C57BL/6j

Mdx小鼠（C57BL/10ScSn-Dmdmdx/J）

Mdx小鼠是模擬人類的骨骼肌營(yíng)養(yǎng)不良的小鼠模型，該小鼠由于DMD基因的自發(fā)性點(diǎn)突變。

（1） Mdx小鼠是位于X染色體的DMD基因第23個(gè)外顯子上的自發(fā)性無(wú)義突變的小鼠模型；雌性個(gè)體純和突變表現(xiàn)為肌營(yíng)養(yǎng)不良表型（X^{dmdXdmd）、雄性個(gè)體只有一條X染色體，攜帶突變即可表現(xiàn)為肌營(yíng)養(yǎng)不良表型（XdmdY）。一般用雄性Mdx小鼠做研究。}

（2） 將雌性雜合子（X^{dmdX+）與C57BL/6j雄性小鼠雜交，產(chǎn)生的子代雄性個(gè)體中：1/2為Mdx小鼠，1/2野生型。}

杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良是一種進(jìn)行性的骨骼肌衰弱疾病，發(fā)病率在男性兒童中占3500-3600分之一。本病的發(fā)生是由于X染色體上編碼肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白的DMD基因的突變所引起。肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白是組成對(duì)于維持肌纖維的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性非常重要的膜復(fù)合物的成員之一。DMD基因的變異包括缺失、重復(fù)或點(diǎn)突變。目前沒(méi)有有效的針對(duì)發(fā)病原因的藥物。

患者在兒童早期主要表現(xiàn)為小腿腓腸肌假性肥大、鴨步和Gowers征，因骨骼肌不斷退化出現(xiàn)肌肉無(wú)力或萎縮并且迅速惡化。在患者生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，可能表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)能力的發(fā)育較正常人遲緩，相對(duì)于同齡兒童，包括坐、站、走等這些運(yùn)動(dòng)表型都要晚。疾病的快速發(fā)展會(huì)導(dǎo)致患者在青春期基本就要靠輪椅活動(dòng)。DMD同時(shí)危及心肌和呼吸肌的功能，患者晚期可出現(xiàn)全身骨骼肌萎縮，大概在7歲到12歲時(shí)會(huì)徹底喪失獨(dú)立行走能力，通常在20歲左右會(huì)因?yàn)樾募?、肺肌無(wú)力（心力衰竭或呼吸衰竭）而死亡。